離子對(duì)試劑是極性藥物分析方法開發(fā)常用的添加劑，可以增強(qiáng)極性化合物的保留，改善藥物與雜質(zhì)的分離，有助于控制更多的雜質(zhì)。由于離子對(duì)試劑不揮發(fā)，不能直接與質(zhì)譜檢測(cè)器聯(lián)用。小編曾親歷一臺(tái)被離子對(duì)試劑污染的質(zhì)譜檢測(cè)器，辛烷磺酸鈉粘附在離子源與透鏡系統(tǒng)上，質(zhì)譜響應(yīng)強(qiáng)且信號(hào)經(jīng)久不衰。無(wú)論進(jìn)樣與否，在質(zhì)譜儀上只能觀察到離子對(duì)試劑的響應(yīng)，持續(xù)抑制目標(biāo)化合物的電離。如果您以為只是一個(gè)質(zhì)量數(shù)的干擾，就太小瞧它們了。離子對(duì)試劑可以生成簇離子，通俗的講就是1個(gè)，2個(gè)…n個(gè)辛烷磺酸鈉簇在一起，在質(zhì)譜上呈現(xiàn)加合離子峰，從而造成正負(fù)兩個(gè)模式寬質(zhì)量范圍的廣泛污染。有了一次污染終生難忘的慘痛教訓(xùn)，當(dāng)離子對(duì)試劑遇上質(zhì)譜鑒定需求，您是否會(huì)選擇繞著走？且慢，島津公司推出在線去除離子對(duì)試劑的方法，且聽小編向您娓娓道來(lái)。
首先，您需要選擇一臺(tái)通用型液相檢測(cè)器。
通用型檢測(cè)器：幫您”看見”離子對(duì)試劑
按照待分析化合物的性質(zhì)可以將離子對(duì)試劑分為陽(yáng)離子型和陰離子型兩種。常見陽(yáng)離子型離子對(duì)試劑有戊烷磺酸鈉、己烷磺酸鈉、庚烷磺酸鈉和辛烷磺酸鈉等。常見陰離子型離子對(duì)試劑有四丁基硫酸氫銨、氫氧化四丁基銨、氯化四丁基銨和溴化四丁基銨等。由于一維流動(dòng)相中離子對(duì)試劑的類型和濃度千差萬(wàn)別，二維方法需要個(gè)性化開發(fā)。由于常見離子對(duì)試劑均無(wú)紫外吸收，島津通用型檢測(cè)器：示差折光檢測(cè)器與蒸發(fā)光散射檢測(cè)器將祝您一臂之力，幫您“看見”離子對(duì)試劑，有效應(yīng)對(duì)流動(dòng)相含離子對(duì)試劑的方法開發(fā)需求。
常規(guī)二維液相在線除鹽系統(tǒng)僅能去除無(wú)機(jī)鹽，無(wú)法去除離子對(duì)試劑。不同于無(wú)機(jī)鹽，離子對(duì)試劑比目標(biāo)物具有更強(qiáng)的疏水性，其在反相色譜柱上的出峰時(shí)間晚于目標(biāo)物，因此無(wú)法采用無(wú)機(jī)鹽類似的方法在線去除。在化學(xué)藥物雜質(zhì)鑒定時(shí)，雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)通常是未知的。未知意味著一切皆有可能。堿性化合物的雜質(zhì)可能是中性或酸性；至佳吸收波長(zhǎng)363 nm的藥物其雜質(zhì)至佳波長(zhǎng)可能在220 nm；極性藥物的雜質(zhì)也可能是非極性的。因此，未知雜質(zhì)的鑒定要求二維運(yùn)行寬梯度并配備二極管陣列檢測(cè)器獲取全波段的紫外吸收信息。
那么，如何有效避免離子對(duì)試劑在高比例有機(jī)相下洗脫帶來(lái)的儀器污染呢？
您需要一支島津SGLC ReDual系列混合模式色譜柱。
ReDual:一款可以同時(shí)分離無(wú)機(jī)、有機(jī)、陰、陽(yáng)離子的神柱
ReDual系列色譜柱，是島津SGLC推出的離子交換反相混合鍵合相色譜柱，共分為三款：
ReDual™ SCX-C18 強(qiáng)陽(yáng)離子交換+反相
ReDual™ CX-C18 陽(yáng)離子交換+反相
ReDual™ AX-C18 陰離子交換+反相
ReDual™ SCX-C18 強(qiáng)陽(yáng)離子交換+反相混合鍵合相色譜柱填料示意
在線去除陰離子對(duì)試劑方案
下圖是采用Shim-pack GIST C18-AQ與ReDual AX-C18 (4.6 mm I. D. × 150 mm L., 5 µm，貨號(hào)426-45415)分析磷酸二氫鈉、四丁基硫酸氫銨和某陰離子型目標(biāo)物混合樣品模擬二維進(jìn)樣的納克級(jí)激光計(jì)數(shù)檢測(cè)器色譜圖。在常規(guī)Shim-pack GIST C18-AQ色譜柱上，四丁基硫酸氫銨出峰時(shí)間在目標(biāo)物之后，不利于雜質(zhì)分析方法的開發(fā)。ReDual AX-C18色譜柱表面鍵合叔胺基團(tuán)，在pH 2-7范圍內(nèi)色譜柱表面帶陽(yáng)離子，除疏水作用外，其對(duì)陰離子具有離子交換作用。在AX-C18色譜柱上，四丁基硫酸氫銨出峰時(shí)間在目標(biāo)物之前，可以通過(guò)閥切換導(dǎo)入廢液實(shí)現(xiàn)在線去除。
在線去除陽(yáng)離子對(duì)試劑方案
下圖是采用Shim-pack GIST C18-AQ與ReDual SCX-C18 (4.6 mm I. D. × 150 mm L., 5 µm，貨號(hào)426-35415)分析磷酸二氫鉀、磷酸二氫鈉、戊/己/庚/辛烷磺酸鈉和某陽(yáng)離子型目標(biāo)物模擬二維進(jìn)樣的納克級(jí)激光計(jì)數(shù)檢測(cè)器色譜圖。在常規(guī)AQ-C18色譜柱上，常見陽(yáng)離子型離子對(duì)試劑出峰時(shí)間在目標(biāo)物之后，不利于雜質(zhì)分析方法的開發(fā)。ReDual SCX-C18色譜柱表面鍵合磺酸基團(tuán)，在pH 2-7范圍內(nèi)色譜柱表面帶陰離子，除疏水作用外，其對(duì)陽(yáng)離子具有離子交換作用。在SCX-C18色譜柱上，常見陽(yáng)離子型離子對(duì)試劑出峰時(shí)間在目標(biāo)物之前，可以通過(guò)閥切換導(dǎo)入廢液實(shí)現(xiàn)在線去除。
應(yīng)用案例：
某堿性藥物注射液雜質(zhì)結(jié)構(gòu)鑒定
某堿性藥物有關(guān)物質(zhì)分析方法使用C18反相色譜柱，流動(dòng)相添加磷酸二氫鉀（磷酸調(diào)節(jié)pH至2.2）與己烷磺酸鈉；二維使用ReDual SCX-C18色譜柱，在線去除己烷磺酸鈉和磷酸二氫鉀。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，質(zhì)譜圖中未見離子對(duì)試劑干擾，成功實(shí)現(xiàn)目標(biāo)雜質(zhì)的質(zhì)譜鑒定（結(jié)構(gòu)略）。
雜質(zhì)2的1級(jí)質(zhì)譜圖
總結(jié)
島津中國(guó)創(chuàng)新中心搭載的特色中心切割二維色譜雜質(zhì)鑒定系統(tǒng)，二維使用島津SGLC公司ReDual™ AX-C18 和ReDual™ SCX-C18混合填料色譜柱，成功實(shí)現(xiàn)一維流動(dòng)相中常見離子對(duì)試劑和無(wú)機(jī)鹽的在線去除，可在極性藥物雜質(zhì)結(jié)構(gòu)鑒定領(lǐng)域廣泛推廣。
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