溴敵隆等抗凝血類鼠藥由于其毒鼠效力強(qiáng)、滅鼠效果好，被廣泛用來(lái)滅鼠。近些年來(lái)，涉及該類鼠藥中毒事（案）件屢有發(fā)生，給社會(huì)穩(wěn)定和人民生命安全造成嚴(yán)重威脅。早期如2005年重慶某地村民帶鼠藥混入壽宴投毒，致31人中毒5人死亡；近期如2022年上半年，青海某地村民稱家中多人出現(xiàn)尿血情況，經(jīng)到醫(yī)院檢查是溴敵隆中毒，后被警方破獲實(shí)為一起鼠藥投毒案。
近期，浙江省公安司法鑒定中心采用在線超臨界流體技術(shù)Online SFE-SFC-MS 系統(tǒng)建立了血液中8種鼠藥的在線超臨界流體提取檢測(cè)方法，簡(jiǎn)化了血液樣品的前處理過(guò)程，具有使用溶劑少、需要樣品量少、綠色環(huán)保的特點(diǎn)，并實(shí)現(xiàn)了樣品提取檢測(cè)的全程自動(dòng)化，相關(guān)成果發(fā)表在《中國(guó)法醫(yī)學(xué)雜志》期刊上。
直擊痛點(diǎn)：前處理方法創(chuàng)新
傳統(tǒng)上，對(duì)血液中這類鼠藥的檢測(cè)一般采用蛋白沉淀法處理血樣后，以LC-MS作為檢測(cè)手段進(jìn)行檢測(cè)，該方法前處理及分析過(guò)程需要大量用到甲醇、乙腈等有機(jī)溶劑，且手動(dòng)前處理容易帶來(lái)人為誤差，耗時(shí)耗力。
超臨界流體色譜(SFC)是以超臨界流體和少量改性劑為流動(dòng)相的新型色譜分離技術(shù)。超臨界流體具有低黏度、有擴(kuò)散性和有溶解性等特點(diǎn)，使得SFC分析具有快速、有效、有分離等優(yōu)勢(shì)。將超臨界流體作為萃取溶劑進(jìn)行超臨界流體萃取(SFE), 可以大大縮短萃取時(shí)間，并且與常規(guī)使用的溶劑萃取法相比，具有使用溶劑少、需要樣品量少、綠色環(huán)保的特點(diǎn)。
圖1. 島津Nexera UC在線SFE-SFC-MS系統(tǒng)
實(shí)驗(yàn)流程：方法學(xué)驗(yàn)證可靠
將100 μL血液樣品與5 g無(wú)水硫酸鈉混勻，裝入5 mL萃取罐中壓緊，按照設(shè)定條件進(jìn)行在線SFE萃取，萃取過(guò)程分為靜態(tài)萃取和動(dòng)態(tài)萃取，萃取物被自動(dòng)引入色譜柱柱頭進(jìn)行捕集，而后按照設(shè)定的SFC-MS條件進(jìn)行分析。樣品處理簡(jiǎn)單快捷，萃取和分離分析過(guò)程均自動(dòng)在線完成。
圖2. SFE萃取過(guò)程
色譜圖
溴敵隆等8種抗凝血類鼠藥的MRM色譜圖如圖3所示，目標(biāo)組分峰形良好，且溴鼠靈、氟鼠靈、鼠得克等手性化合物的異構(gòu)體可以實(shí)現(xiàn)基線分離，可見，SFC較適宜用于手性物質(zhì)分離。
圖3. 8種鼠藥的SFC-MS圖
萃取效率
為考察SFE對(duì)各組分的萃取效率，通過(guò)重復(fù)對(duì)同一萃取罐內(nèi)樣品連續(xù)四次在線SFE-SFC-MS聯(lián)用分析，以每次萃取所得的鼠藥峰面積與四次萃取峰面積和的比值表示歸一化萃取率。結(jié)果表明：前兩次萃取的效率較有，各組分前兩次的萃取率之和在73.02%~93.62%之間，基本可以滿足實(shí)驗(yàn)要求。因此，后續(xù)實(shí)驗(yàn)時(shí)，SFE的萃取次數(shù)固定為兩次。
表2. SFE的歸一化萃取效率
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