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細(xì)胞培養(yǎng)

提供來(lái)源:上海百賀 日期:2023年01月03日

取您所需,利用徠卡顯微系統(tǒng)的細(xì)胞和組織培養(yǎng)倒置顯微鏡提高活細(xì)胞成像工作流程中的效率。

這些使用簡(jiǎn)便的顯微鏡允許您根據(jù)自身需求配置相應(yīng)的成像解決方案,可搭載靈活多樣的聚光鏡選件和數(shù)字成像記錄功能,從未為您的實(shí)驗(yàn)室打造恰到好處的解決方案。

徠卡細(xì)胞培養(yǎng)顯微鏡系統(tǒng)特性:

操作簡(jiǎn)便,所需的培訓(xùn)和維護(hù)量很小,以便您將精力都集中在研究工作上

冷光源 LED 照明在所有光亮度級(jí)別下提供恒定的色溫

簡(jiǎn)易熒光裝置 (選配) 可輕松呈現(xiàn)您的熒光標(biāo)記

高清成像 (選配) - 將高清攝像頭直接連接到顯示器或 PC;提供高質(zhì)量的可發(fā)表圖像        

靈活的工作距離,較高可達(dá) 80 mm,可容納載玻片、petri 培養(yǎng)皿、多孔板和較高的培養(yǎng)瓶

細(xì)胞工廠解決方案可容納較高 400 mm 的器皿

 

細(xì)胞分類(lèi)

細(xì)胞外形

實(shí)驗(yàn)室培育的動(dòng)物細(xì)胞可根據(jù)多項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行區(qū)分:

顯微鏡下可以輕松地識(shí)別其形態(tài)。成纖維樣細(xì)胞為雙很或多很細(xì)長(zhǎng)形狀,而上皮樣細(xì)胞呈多邊形。與上面兩種細(xì)胞不同的是,淋巴母細(xì)胞樣細(xì)胞并非貼壁生長(zhǎng),而是懸浮生長(zhǎng)。

細(xì)胞的類(lèi)型可細(xì)分為永生細(xì)胞、原代細(xì)胞和干細(xì)胞。

細(xì)胞組織形式可謂豐富多樣,從簡(jiǎn)單的二維單層培養(yǎng)細(xì)胞到二維共培養(yǎng)細(xì)胞,再到三維球狀細(xì)胞團(tuán)和類(lèi)器官

Fibroblast-like cells, epithelial-like cells and lymphoblast-like cells (from left to right).

 

名稱(chēng)

形態(tài)學(xué)

來(lái)源

COS

成纖維細(xì)胞樣

非洲綠猴

HEK 293

上皮樣

人類(lèi)

CHO

上皮樣

倉(cāng)鼠

MDCK

上皮樣

HeLa 細(xì)胞

成纖維細(xì)胞樣

人類(lèi)

Jurkat

淋巴母細(xì)胞樣

人類(lèi)

 

將細(xì)胞系用于細(xì)胞培養(yǎng)的一些實(shí)例。

細(xì)胞培養(yǎng)材料

如何培養(yǎng)細(xì)胞

動(dòng)物細(xì)胞在各類(lèi)不同的器皿中培養(yǎng),涵蓋用于基礎(chǔ)研究的小型微流體裝置、用于篩選目的的 96 孔板乃至用于大規(guī)模藥物生產(chǎn)的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和細(xì)胞工廠。

鑒于其一次性使用特點(diǎn),多數(shù)容器使用塑料制成。其它器皿則專(zhuān)為顯微鏡應(yīng)用優(yōu)化設(shè)計(jì),因此具有玻璃底。

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基包含:

  • 能量來(lái)源
  • 氨基酸
  • 維生素
  • 以及鹽類(lèi)

此外,它還包含緩沖系統(tǒng)和 pH 值指示劑,用于檢查 pH 值是否平衡。

細(xì)胞培養(yǎng)維護(hù)

您的日常工作內(nèi)容是什么?

由于細(xì)胞會(huì)消耗培養(yǎng)基中的成分,定期補(bǔ)充培養(yǎng)基。在這種情況下,細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中應(yīng)進(jìn)行目視檢查,以觀察匯合程度和健康度并檢測(cè)潛在的微生物污染。

永生細(xì)胞系的一個(gè)特征就是無(wú)限增殖。因此,它們時(shí)不時(shí)進(jìn)行分裂 (傳代) 并轉(zhuǎn)移至單獨(dú)的培養(yǎng)器皿中。

通常,培養(yǎng)的細(xì)胞在用于實(shí)驗(yàn)前就進(jìn)行了基因改造。例如,借助 轉(zhuǎn)染操作,研究人員為所需要的蛋白質(zhì)添加 熒光標(biāo)記 ,以便通過(guò)顯微鏡將其可視化。

MDCK cells in different confluence stadiums.

顯微鏡 – 基本要求

我需要哪種工具?

為管理細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的日常工作,顯微鏡是一件必需品。此類(lèi)顯微鏡須具備倒置配置。倒置顯微鏡采用“物鏡位于樣品下方,聚光鏡位于樣品上方”的設(shè)計(jì),這樣就能使物鏡盡量貼近細(xì)胞,并在上方保持較大的工作距離。

由于動(dòng)物細(xì)胞的固有反差很低,細(xì)胞培養(yǎng)顯微鏡提供諸如相差等反差觀察法。DIC (微分干涉相差) 在這里無(wú)法發(fā)揮作用,因?yàn)樵摷夹g(shù)無(wú)法配合塑料器皿用于細(xì)胞培養(yǎng)。DIC 有一個(gè)很好的替代方案,那就是 IMC (整合調(diào)制相差),該技術(shù)不僅能搭配塑料容器使用,而且無(wú)需借助專(zhuān)用物鏡或棱鏡。此外,細(xì)胞培養(yǎng)顯微鏡應(yīng)易于操控,以避免浪費(fèi)時(shí)間。 

徠卡細(xì)胞培養(yǎng)顯微鏡具備良好的易用性,并可針對(duì)個(gè)性化需求提供靈活多樣的反差觀察方法。

顯微鏡 – 高級(jí)要求

我需要哪種工具?

一種很常見(jiàn)的細(xì)胞生物學(xué)科研手段是使用熒光標(biāo)記轉(zhuǎn)染細(xì)胞,以便使用研究型顯微鏡進(jìn)行后續(xù)研究。如果您使用熒光蛋白,您的細(xì)胞培養(yǎng)顯微鏡還需要配備熒光選件,以用于控制轉(zhuǎn)染效率。

為實(shí)現(xiàn)重要的記錄和標(biāo)準(zhǔn)化目的,顯微鏡應(yīng)配備數(shù)字?jǐn)z像頭,至好能夠記錄和梳理拍攝的數(shù)據(jù)。

由于細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室都存在空間問(wèn)題,細(xì)胞培養(yǎng)顯微鏡的尺寸不宜過(guò)大,例如,至好能安裝在超凈臺(tái)中。此外,至新趨勢(shì)都要求顯微鏡設(shè)計(jì)得足夠小巧和穩(wěn)固,以便在培養(yǎng)箱內(nèi)部使用。

Neuronal cells in brightfield, phase contrast and fluorescence microscopy (from left to right)

 

明場(chǎng)

相差

微分干涉相差 (DIC)

整合調(diào)制相差 (IMC)

熒光

放大倍率

工作距離

攝像頭

Leica DM IL LED

+

+

-

+

+

PH:5x 至 63x

IMC:10x、20x、32x、40x

40 mm、80 mm

+ (自由選擇)

Leica DMi1

+

+

-

-

-

10x、20x、40x

40 mm、50 mm、80 mm

+ (集成式)

 

用于大批量生產(chǎn)應(yīng)用的顯微鏡

生產(chǎn)生物材料 (例如蛋白質(zhì)、疫苗或抗體) 需要在大型器皿中培養(yǎng)細(xì)胞。

為應(yīng)對(duì)這一要求,相關(guān)的細(xì)胞培養(yǎng)顯微鏡須具備較大的工作距離和視場(chǎng)。此外,它需要具備很高的穩(wěn)定性,以便牢固地承載大型器皿乃至大量器皿。 

Leica DM IL LED 可使用超長(zhǎng)透射光照明臂進(jìn)行配置,以便您自由調(diào)節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)器皿所需要的工作距離,高度至高可達(dá) 40 cm。

細(xì)胞檢測(cè)

活細(xì)胞應(yīng)用

細(xì)胞培養(yǎng)是一個(gè)動(dòng)態(tài)過(guò)程。與其它任何生物系統(tǒng)一樣,細(xì)胞的生長(zhǎng)和行為有時(shí)難以預(yù)測(cè)。因此,長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)比僅僅在單個(gè)時(shí)間點(diǎn)檢查細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程更具優(yōu)勢(shì)。

而這正是顯微鏡能夠一展所長(zhǎng)的地方,您可將其放置在培養(yǎng)箱中,以便不間斷地監(jiān)測(cè)細(xì)胞。例如,借助這一特性,您可隨時(shí)隨地檢查細(xì)胞培養(yǎng)的匯合程度。 

           

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