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透射電子顯微鏡原理

提供來(lái)源:上海百賀 日期:2011年07月24日

透射電子顯微鏡(transmission electron microscope, TEM)是利用透射電子成像,因而要求樣品?。铀匐妷?00kV時(shí),樣品厚度不能超過(guò)100nm)。其結(jié)構(gòu)包括三大部分:電子學(xué)系統(tǒng)、真空系統(tǒng)和電子光學(xué)系統(tǒng)。電子光學(xué)系統(tǒng)提供電子束,在高真空條件下照射到樣品上,經(jīng)過(guò)成像系統(tǒng)中的物鏡成像,再經(jīng)過(guò)中間鏡和投影鏡的進(jìn)一步放大,獲得的圖像記錄在CCD上。TEM使用油擴(kuò)散泵(Diffuse Pump)來(lái)實(shí)現(xiàn)高真空。由于油擴(kuò)散泵的啟動(dòng)和關(guān)閉都需要30分鐘,導(dǎo)致TEM開(kāi)機(jī)和關(guān)機(jī)都至少需要30分鐘。TEM發(fā)射出的高能電子束轟擊到光路元器件上以及樣品上,會(huì)產(chǎn)生以X-ray為主的等等其他射線(xiàn)輻射,因此建議孕婦等過(guò)敏性體質(zhì)者盡量避免接觸TEM。
由于平臺(tái)現(xiàn)有TEM的加速電壓為100kV,是一臺(tái)生物電鏡,因此無(wú)法滿(mǎn)足材料科學(xué)上要求的高放大倍數(shù)(30萬(wàn)倍以上)、高分辨、衍射花樣等實(shí)驗(yàn)要求,有這方面需求的科研人員請(qǐng)與武大、地大等單位聯(lián)系。


TEM是研究結(jié)構(gòu)生物學(xué)的有力工具。除了電鏡之外,現(xiàn)在尚沒(méi)有一種儀器能使人們用肉眼直接觀(guān)察到亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)、蛋白大分子(直徑20nm以上)的排列結(jié)構(gòu)形態(tài)。利用電鏡觀(guān)察超微結(jié)構(gòu)的形態(tài)和位置,可以研究解o部分形態(tài)和功能的問(wèn)題。

TEM是研究超微結(jié)構(gòu)的工具之一,但它存在一些缺點(diǎn):(1)TEM的價(jià)格昂貴,維護(hù)費(fèi)用及其配件、耗材都在幾百甚至上千美元以上。(2)TEM的維護(hù)和使用均要求較高的技術(shù),也是一個(gè)精細(xì)、繁瑣的過(guò)程。TEM每3天要做一次維護(hù)和電子光路調(diào)整,每次調(diào)整和維護(hù)至少需要2個(gè)小時(shí)。(3)TEM不能像光鏡那樣隨時(shí)可用,受到很多限制。TEM放大倍數(shù)有很多,再加上切片的限制,因此無(wú)法實(shí)現(xiàn)始終同一放大倍數(shù)的拍攝。(4)TEM樣品置于真空中,因此對(duì)活體標(biāo)本的觀(guān)察是不可能的。(5)TEM樣品取材及制備存在局限性。TEM取材要求只有1mm3大小塊狀,而且觀(guān)察面更小,如果把一個(gè)厚6μm的細(xì)胞核切成60nm的超薄切片,可以且100張,而一般光鏡的石蠟切片厚度即為6μm。如果要得到一張光鏡樣品切片的信息,就不得不記錄下100張超薄切片的信息,工作量就要增加了100倍。(6)TEM的觀(guān)察視野較小,只有6μm×9μm,當(dāng)放大10 000倍時(shí),要想記錄1 mm2的標(biāo)本信息,就需要拍攝18 500張照片。因此在進(jìn)行電鏡觀(guān)察研究時(shí),必要有選擇性、有代表性地嚴(yán)格選擇樣品。
使用TEM前,首先要樹(shù)立一個(gè)概念:TEM不是光鏡的再放大,TEM的研究對(duì)象不是組織,而是細(xì)胞器,是以細(xì)胞為整體研究細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)的工具。組織切片能解決問(wèn)題的沒(méi)有做TEM的必要!